Double Digestion用推奨Universal Buffer

2種類の制限酵素を同時に用いて基質DNAを切断するDouble Digestionは、時間を節約する方法として一般的に用いられている。TaKaRaでは、Universal Bufferを供給すると共に、各酵素ごとにUniversal Buffer別の相対活性を表示しているが（参考：Universal Buffer・Basal Bufferによる制限酵素活性表示システム）、中にはDouble Digestionに使用するUniversal Bufferの選択に困る酵素の組合わせがある。
この表は、pUC系プラスミドのクローニングサイトに切断部位を持つ酵素を中心に、Double Digestionに使用する最適なUniversal Buffer条件を示している。
なお、表中のUniversal Bufferの前に記している「数字×」は、各Bufferの最終濃度を表示している。Universal Bufferは全て10×濃度で供給しているので、0.5×は20倍、1×は10倍、2×は5倍に希釈して使用する。また、BSAも10×濃度（0.1％）なので、10倍希釈して最終濃度0.01％にして使用する。

表  主要制限酵素Double Digestion用推奨Universal Buffer

Enzyme

添付 Buffer

Acc I

BamH I

Bgl II

Cla I

EcoR I

EcoR V

Hinc II

Hind III

Kpn I

Nco I

Nde I

Not I

Pst I

Pvu I

Sac I

Sal I

Sma I

Spe I

Sph I

Xba I

Xho I

Acc I

10×M

−

0.5×K

1×T

1×M

1×M

0.5×K

1×M

1×M

1×M

1×M +BSA

1×T

0.5×K +BSA

1×M

0.5×K

1×M

1.5×T

1×T +BSA

1×M

0.5×K

1×M

1×M

BamH I

10×K

0.5×K

−

1×K

1×K

1×K

1×K

0.5×K

1×K

0.5×K

1×K +BSA

1×K

0.5×K +BSA

1×K

1×K

0.5×K

1.5×T

0.5×T +BSA

1×K

1×K

0.5×K

1×K

Bgl II

10×H

1×T

1×K

−

1×H

1×H

1×H

2×K

1×K

1×T

1×K +BSA

1×H

1×H +BSA

1×H

1×K

0.5×K

1×H

1×T +BSA

1×H

1×H

2×T

1×H

Cla I

10×M

1×M

1×K

1×H

−

1×H

1×H

1×M

1×M

1×M

1×K +BSA

1×H

1×H +BSA

1×H

1×K

1×M

1×H

1×T +BSA

1×M

1×H

1×M

1×H

EcoR I

10×H

1×M

1×K

1×H

1×H

−

1×H

1×M

1×M

1×M

1×K +BSA

1×H

1×H +BSA

1×H

1×K

1×M

1×H

1×T +BSA

1×H

1×H

1×M

1×H

EcoR V

10×H

0.5×K

1×K

1×H

1×H

1×H

−

2×T

1×K

0.5×K

1×K +BSA

1×H

1×H +BSA

1×H

1×K

0.5×K

1×H

0.5×K +BSA

1×H

1×H

2×T

1×H

Hinc II

10×M

1×M

0.5×K

2×K

1×M

1×M

2×T

−

1×M

1×M

1×M +BSA

1×T

0.5×K +BSA

1×M

0.5×K

1×M

1.5×K

1×T +BSA

1×M

2×T

1×M

1×M

Hind III

10×M

1×M

1×K

1×K

1×M

1×M

1×K

1×M

−

1×M

1×K +BSA

1×K

0.5×K +BSA

1×M

1×K

1×M

1.5×K

1×T +BSA

1×M

1×K

1×M

1×M

Kpn I

10×L

1×M

0.5×K

1×T

1×M

1×M

0.5×K

1×M

1×M

−

0.5×K +BSA

1×T

0.5×K +BSA

1×M

0.5×K

1×L

1.5×T +BSA

1×T +BSA

1×M

0.5×K

1×M

1×M

Nco I

10×K +BSA

1×M +BSA

1×K +BSA

1×K +BSA

1×K +BSA

1×K +BSA

1×K +BSA

1×M +BSA

1×K +BSA

0.5×K +BSA

−

1×K +BSA

0.5×K +BSA

1×K +BSA

1×K +BSA

0.5×K +BSA

1.5×T +BSA

1×T +BSA

1×K +BSA

1×K +BSA

1×M +BSA

1×K +BSA

Nde I

10×H

1×T

1×K

1×H

1×H

1×H

1×H

1×T

1×K

1×T

1×K +BSA

−

1×H +BSA

1×H

1×K

1×T

1×H

1×T +BSA

1×H

1×H

1×T

1×H

Not I

10×H +BSA +Triton

0.5×K +BSA

0.5×K +BSA

1×H +BSA

1×H +BSA

1×H +BSA

1×H +BSA

0.5×K +BSA

0.5×K +BSA

0.5×K +BSA

0.5×K +BSA

1×H +BSA

−

1×H +BSA

2×K +BSA

0.5×K +BSA

1×H +BSA

0.5×T +BSA

1×H +BSA

1×H +BSA

0.5×K +BSA

1×H +BSA

Pst I

10×H

1×M

1×K

1×H

1×H

1×H

1×H

1×M

1×M

1×M

1×K +BSA

1×H

1×H +BSA

−

1×K

1×M

1×H

0.5×T +BSA

1×H

1×H

1×M

1×H

Pvu I

10×K +BSA

0.5×K

1×K

1×K

1×K

1×K

1×K

0.5×K

1×K

0.5×K

1×K +BSA

1×K

2×K +BSA

1×K

−

0.5×K

1.5×K +BSA

1×K +BSA

1×K

1×K

0.5×K

1×K

Sac I

10×L

1×M

0.5×K

0.5×K

1×M

1×M

0.5×K

1×M

1×M

1×L

0.5×K +BSA

1×T

0.5×K +BSA

1×M

0.5×K

−

1.5×T +BSA

1×T +BSA

1×M

0.5×K

1×M

1×M

Sal I

10×H

1.5×T

1.5×T

1×H

1×H

1×H

1×H

1.5×K

1.5×K

1.5×T +BSA

1.5×T +BSA

1×H

1×H +BSA

1×H

1.5×K +BSA

1.5×T +BSA

−

1.5×T +BSA

1×H

1×H

1.5×T

1×H

Sma I

10×T +BSA

1×T +BSA

0.5×T +BSA

1×T +BSA

1×T +BSA

1×T +BSA

0.5×K +BSA

1×T +BSA

1×T +BSA

1×T +BSA

1×T +BSA

1×T +BSA

0.5×T +BSA

0.5×T +BSA

1×K +BSA

1×T +BSA

1.5×T +BSA

−

1×T +BSA

0.5×T +BSA

1×T +BSA

1×T +BSA

Spe I

10×M

1×M

1×K

1×H

1×M

1×H

1×H

1×M

1×M

1×M

1×K +BSA

1×H

1×H +BSA

1×H

1×K

1×M

1×H

1×T +BSA

−

1×H

1×M

1×H

Sph I

10×H

0.5×K

1×K

1×H

1×H

1×H

1×H

2×T

1×K

0.5×K

1×K +BSA

1×H

1×H +BSA

1×H

1×K

0.5×K

1×H

0.5×T +BSA

1×H

−

2×T

1×H

Xba I

10×M +BSA

1×M

0.5×K

2×T

1×M

1×M

2×T

1×M

1×M

1×M

1×M +BSA

1×T

0.5×K +BSA

1×M

0.5×K

1×M

1.5×T

1×T +BSA

1×M

2×T

−

1×M

Xho I

10×H

1×M

1×K

1×H

1×H

1×H

1×H

1×M

1×M

1×M

1×K +BSA

1×H

1×H +BSA

1×H

1×K

1×M

1×H

1×T +BSA

1×H

1×H

1×M

−

注1） 1μg DNA/50μl反応液に対し各酵素10Uを添加して37℃, 1時間反応させることで完全分解できることを確認している。
注2） 反応液中のグリセロール濃度は、Star活性をできるだけ抑えるために10％以下で使用する。
注3） DNAの種類や高次構造、認識切断部位が近接している場合などは、完全分解できない場合がある。