Universal Buffer・Basal Bufferによる制限酵素活性表示システム

反応液別相対活性

TaKaRaでは、Universal Buffer〔5種 Buffer中1種、■〕で酵素活性を測定し、その値を表示するシステムを採用している。その酵素活性を100％とした際の、各Universal Bufferでの相対活性を以下に記載する。（　）は、Star活性等の影響を受けやすいバッファーを示している。これらの影響を避けるため、なるべく■か■のバッファーを使用することが望ましい。なお、Acc III、Bal I、Bbe I、Bcn I、Bgl I、Bpu1102 I、Cfr10 I、Eam1105 I、Eco52 I、Nru I、PshB I、SnaB I、Ssp I、Taq I 、VpaK11B I（15品目）については、Basal Bufferを使用する。Basal Bufferの組成は各々の制限酵素で異なる（「Basal Bufferの組成」を参照）。また、Double digestionの参考に、各Universal Buffer別の使用推奨酵素〔反応液別相対活性■および■酵素〕を列挙した。なお、反応温度については酵素ごとに記載している。

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添付・活性測定Buffer

■

使用推奨Buffer

制限酵素 相対活性（％） L M H K T+BSA Basal*1 Aat II <20 <20 <20 <20 100 120 Acc I 20 100 <20 (<20) 160 80 Acc II (260) 100 <20 20 200 160 Acc III (<20) (<20) 20 (80) (<20) 100 Afa I 60 60 40 60 100 100 　 Afl II 20 80*2 <20 <20 140 120 Alu I 100 100 <20 40 200 120 Aor13H I <20 20 <20 80*2 80 100 Aor51H I 80 100 <20 20 120 120 Apa I 100 <20 <20 <20 <20 120 　 ApaL I 100 20 <20 <20 120 120 Ava I (<20) 100 20 40 100 120 Ava II 80 100 <20 20 100 100 Bal I 20 20 <20 <20 40 100 BamH I (<20) <20 40 100 (<20) 80 　 Ban II (120) (120) 100 80 (100) 100 Bbe I <20 <20 <20 <20 <20 100 Bcn I <20 20 40 60 60 100 Bgl I <20 <20 20 40 <20 100 Bgl II <20 20 100 (100) (60) 100 　 Bln I <20 20 40 100 20 120 BmeT110 I <20 <20 20 100 <20 140 BmgT120 I <20 <20 100 40 <20 240 Bpu1102 I <20 <20 <20 40 60 100 BspT104 I 100 60 <20 <20 100 120 　 BspT107 I <20 20 80 100 20 100 Bsp1286 I 100 20 <20 <20 60 100 Bsp1407 I 20 60 20 20 100 100 BssH II 100 100 60 20 140 100 BstP I (<20) (60) 100 (100) (100) 100 　 BstX I <20 40 100 <20 <20 120 Bst1107 I (<20) 60 100 100 40 100 Cfr10 I (<20) (<20) (<20) 40 (20) 100 Cfr13 I 60 80 <20 100 80 100 Cla I 40 100 120 100 60 100 　 Cpo I <20 <20 80 100 <20 100 Dra I 100 100 60 100 80 80 Eae I 60 100 <20 <20 120 160 Eam1105 I (<20) (40) 20 40 (40) 100 EcoO65 I (20) (60) 60*2 40 40 100 　 EcoO109 I 100 60 <20 <20 100 160 EcoR I (20) (100) 100 (120) (80) 120 EcoR V (<20) (40) 100 (120) (40) 100 EcoT14 I (<20) (40) 100 120 (60) 100 EcoT22 I <20 20 100 (140) (20) 120 　 Eco52 I <20 <20 <20 <20 <20 100 Eco81 I <20 100 <20 <20 100 160 Fba I (<20) (<20) (80) 100 (20) 100 Fok I (20) (60)*2 <20 <20 (200) 100 Fse I (120) 100 <20 <20 80 100 　 Hae II 80 100 <20 80 140 100

制限酵素 相対活性(％) L M H K T+BSA Basal*1 Hae III 60 100 100 60 100 100 Hap II 100 60 <20 <20 100 80 Hha I 80 100 100 120 120 100 Hinc II 20 100 20 40 100 80 Hind III (60) 100 <20 200 (100) 80 　 Hinf I 80 100 100 160 60 100 Hin1 I 40 80*2 <20 20 60 160 Hpa I <20 (40) 20 100 (80) 100 Kpn I 100 60 <20 <20 (100) 80 Mbo I 20 40 60 100 40 100 　 Mbo II 100 60 <20 <20 60 100 Mfl I 100 80 <20 <20 80 100 Mlu I 60 60 100 (100) 60 100 Msp I 80 80 <20 100 100 80 Mun I (200) 100*2 <20 <20 160 100 　 Mva I (<20) (40) 80 100 (20) 120 Nae I 100 <20 <20 <20 100 120 Nco I (40) (60) 20 60*2 (60) 160 Nde I <20 40 100 100 80 100 Nhe I (120) 100 <20 <20 (160) 100 　 Not I (<20) (<20) 20*3 <20 (<20) 100 Nru I 0 <20 20 20 <20 100 Nsb I 40 20 <20 60 100 100 PmaC I 100 80 <20 <20 100 100 PshA I 20 40 <20 100 60 160 　 PshB I (20) (40) 20 40 40 100 Psp1406 I 20 60 <20 <20 100 100 Pst I (<20) (60) 100 80 (20) 80 Pvu I (<20) (20) (40) 80*2 (40) 120 Pvu II (80) 100 40 <20 (40) 100 　 Sac I 100 60 <20 <20 80 80 Sac II 40 20 <20 <20 100 40 Sal I <20 <20 100 (20) <20 120 Sau3A I (60) 80 100 <20 (80) 100 Sca I (<20) (<20) 100 (60) (<20) 100 　 Sfi I (40) 100 <20 <20 100 100 Sma I <20 <20 <20 <20 100 100 SnaB I (20) (40) <20 <20 (40) 100 Spe I (80) 100 80 100 (80) 100 Sph I (20) (40) 100 120 (20) 100 　 Sse8387 I (120) 60*2 <20 <20 (60) 100 Ssp I (<20) (60) 40 (100) (80) 100 Stu I 60 100 60 80 140 100 Swa I (<20) <20 100 20 <20 100 Taq I 40 80 60 60 80 100 　 Tth111 I (20) 80 40 100 (80) 120 Van91 I <20 (20) 60 100 (60) 100 VpaK11B I <20 <20 60 (40) <20 100 Xba I <20 80*2 20 <20 120 120 Xho I <20 60 100 160 60 100 　 Xsp I <20 60 <20 100 160 100

*1 Basal Buffer の組成は各々の制限酵素で異なる
*2 ＋0.01% BSA →100%
   Afl II、Aor13H I、EcoO65 I、Fok I、Hin1 I、Mun I、Nco I、Pvu I、Sse8387 I、Xba I
*3 ＋0.01% BSA＋0.01% Triton X-100 →100% Not I

　

Universal Buffer別酵素

L	M	H	K	T+BSA
Afa I	Acc I	Ban II	Afa I	Aat II
Alu I	Acc II	Bgl II	Aor13H I*1	Acc I
Aor51H I	Afa I	BspT107 I	BamH I	Acc II
Apa I	Afl II*1	BssH II	Ban II	Afa I
ApaL I	Alu I	BstP I	Bcn I	Afl II
Ava II	Aor51H I	BstX I	Bln I	Alu I
BspT104 I	Ava I	Bst1107 I	BspT107 I	Aor13H I
Bsp1286 I	Ava II	Cla I	Bst1107 I	Aor51H I
BssH II	Bsp T104 I	Cpo I	Cfr13 I	ApaL I
Cfr13 I	Bsp 1407 I	Dra I	Cla I	Ava I
Dra I	BssH II	EcoO65 I*1	Cpo I	Ava II
Eae I	Bst1107 I	EcoR I	Dra I	Bcn I
EcoO109 I	Cfr13 I	EcoR V	EcoT14 I	Bpu 1102 I
Hae II	Cla I	EcoT14 I	Fba I	Bsp T104 I
Hae III	Dra I	EcoT22 I	Hae II	Bsp 1286 I
Hap II	Eae I	Hae III	Hae III	Bsp 1407
Hha I	EcoO109 I	Hha I	Hha I	BssH II
Hinf I	Eco81 I	Hinf I	Hind III	Cfr13 I
Kpn I	Fok I*1	Mbo I	Hinf I	Cla I
Mbo II	Fse I	Mlu I	Hpa I	Dra I
Mfl I	Hae II	Mva I	Mbo I	Eae I
Mlu I	Hae III	Nde I	Msp I	EcoO109 I
Msp I	Hap II	Not I*2	Mva I	Eco81 I
Nae I	Hha I	Pst I	Nco I*1	Fse I
PmaC I	Hinc II	Sal I	Nde I	Hae II
Sac I	Hind III	Sau3A I	Nsb I	Hae III
Stu I	Hinf I	Sca I	PshA I	Hap II
	Hinl I*1	Spe I	Pst I	Hha I
	Kpn I	Sph I	Pvu I*1	Hinc II
	Mbo II	Stu I	Spe I	Hinf I
	Mfl I	Swa I	Sph I	Hinl I
	Mlu I	Taq I	Stu I	Mbo II
	Msp I	Van91 I	Taq I	Mfl I
	Mun I*1	VpaK11B I	Tth111 I	Mlu I
	Nhe I	Xho I	Van91 I	Msp I
	PmaC I		Xho I	Mun I
	Psp 1406 I		Xsp I	Nae I
	Pvu II			Nde I
	Sac I			Nsb I
	Sau3A I			PmaC I
	Sfi I			PshA I
	Spe I			Psp1406 I
	Sse8387 I*1			Sac I
	Stu I			Sac II
	Taq I			Sfi I
	Tth111 I			Sma I
	Xba I*1			Stu I
	Xho I			Taq I
	Xsp I			Xba I
				Xho I
				Xsp I

*1 ＋0.01% BSA   *2 ＋0.01% BSA＋0.01% Triton X-100

　

　

Universal Buffer Set

TaKaRaでは、各制限酵素に活性測定に用いた10×Buffer を添付しています。また、これらをセットにしたUniversal Buffer Set もご用意しております。各制限酵素をお買い上げいただく際、ご要望があれば1セットを無料で商品に同封いたしますので、ご用命ください。なお、当セットのみの発送はお受けできませんのでご了承ください。

　

■Universal Buffer Set内容物組成

1.	10x L   1 ml	100 mM	Tris-HCl (pH7.5)
		100 mM	MgCl2
		10 mM	Dithiothreitol
2.	10x M   1 ml	100 mM	Tris-HCl (pH7.5)
		100 mM	MgCl2
		10 mM	Dithiothreitol
		500 mM	NaCl
3.	10x H   1 ml	500 mM	Tris-HCl (pH7.5)
		100 mM	MgCl2
		10 mM	Dithiothreitol
		1,000 mM	NaCl
4.	10x K   1 ml	200 mM	Tris-HCl (pH8.5)
		100 mM	MgCl2
		10 mM	Dithiothreitol
		1,000 mM	KCl
5.	10x T   1 ml (BSA-free)	330 mM	Tris-acetate (pH7.9)
		100 mM	Mg-acetate
		5 mM	Dithiothreitol
		660 mM	K-acetate
6.	0.1% BSA   1 ml   滅菌水に溶解
7.	0.1% Triton X-100   1 ml

　

■使用上の注意

反応液中に1/10量になるよう、バッファーを加える。
10×T溶液には、BSAは含まれていないので必ず最終濃度0.01％になるように、BSAを使用時に添加する。一部の制限酵素（*1と*2）では、反応系にBSAやTriton X-100を加えた場合に100％の活性を示すように設定されている。酵素に添付されているBSAやTriton X-100は10×濃度（0.1％）なので、バッファーと同様に反応液の1/10量を加えて反応を行うこと。

　

■保存

−20℃

　

参考文献

1）Maniatis, T., et al.（1982）“Molecular Cloning”Cold Spring Harbor Laboratory, 98-106.
2）O'Farrell, P. H., et al.（1980） Mol. Gen. Genet. 179, 421-435.

　

10 × Loading Buffer

TaKaRaでは全制限酵素およびPremix制限酵素に10×Loading Buffer（1 ml）を添付しています。

　

■組成

1%		SDS
50%		Glycerol
0.05%		Bromophenol Blue

　

■使用上の注意

反応液量の1/10量以上の10×Loading Bufferを添加し、酵素反応を止め、アガロースゲルにアプライすること。また、室温での保存中にSDSが析出することがあるが、温浴で溶解して使用すること。

　

■保存

開封後は室温